?? 企業(yè)聚焦：扎根基礎(chǔ)研究，賦能生命科學(xué)探索

美國(guó)Transomic生物公司自創(chuàng)立以來，始終將自身的使命鎖定在生命科學(xué)技術(shù)的前沿。這是一家致力于為科研工作者提供源自生物技術(shù)最新進(jìn)展的下一代基因調(diào)節(jié)工具的專業(yè)企業(yè)。在生物科技飛速發(fā)展的浪潮中，Transomic并沒有隨波逐流，而是選擇了一條更為務(wù)實(shí)且富有挑戰(zhàn)的道路——專注于基因組工具的開發(fā)與優(yōu)化。

企業(yè)的核心信念在于相信科學(xué)技術(shù)的力量，這種力量不僅能夠促進(jìn)人類對(duì)生物系統(tǒng)的深層理解，更能在長(zhǎng)遠(yuǎn)上提高生命的質(zhì)量。為了實(shí)現(xiàn)這一愿景，Transomic與多家科研機(jī)構(gòu)及實(shí)驗(yàn)室建立了深度的合作關(guān)系。企業(yè)的研發(fā)團(tuán)隊(duì)不僅具備深厚的專業(yè)背景，更對(duì)生命科學(xué)研究人員在實(shí)際工作中所需的工具有著極為透徹的理解。這種來自科研、服務(wù)科研的雙向互動(dòng)，使得Transomic能夠迅速將實(shí)驗(yàn)室中的前沿發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為可供廣大科研人員使用的成熟產(chǎn)品。

在Transomic的企業(yè)理念中，他們不僅僅是提供產(chǎn)品的供應(yīng)商，更是科研人員的合作伙伴。企業(yè)致力于以具有成本效益和技術(shù)支持的方式，提供覆蓋全基因組的發(fā)現(xiàn)技術(shù)。無論是基礎(chǔ)的基因功能研究，還是復(fù)雜的疾病機(jī)制探索，亦或是藥物靶點(diǎn)的篩選，Transomic都力求通過其豐富的產(chǎn)品線和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度，成為各大基因組實(shí)驗(yàn)室值得信賴的后盾。他們的目標(biāo)很明確：通過不斷優(yōu)化的基因組工具組合與經(jīng)過流程驗(yàn)證的技術(shù)平臺(tái)，幫助科研人員撥開基因調(diào)控的迷霧，加速科學(xué)發(fā)現(xiàn)的進(jìn)程。

?? 下圖為上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司作為美國(guó)Transomic授權(quán)代理商的授權(quán)書

?? 核心優(yōu)勢(shì)：多維度的技術(shù)積淀與全流程的服務(wù)保障

在競(jìng)爭(zhēng)激烈的生物試劑與工具市場(chǎng)，Transomic之所以能夠占據(jù)一席之地，離不開其在多個(gè)維度上建立的核心競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。這些優(yōu)勢(shì)不僅體現(xiàn)在產(chǎn)品的技術(shù)含量上，更滲透在產(chǎn)品質(zhì)量控制、技術(shù)更新迭代以及客戶服務(wù)體驗(yàn)的每一個(gè)細(xì)節(jié)中。

1. 前沿技術(shù)的快速轉(zhuǎn)化與應(yīng)用

Transomic的一大顯著特點(diǎn)是其對(duì)新興技術(shù)的敏銳捕捉和高效轉(zhuǎn)化能力。例如，在CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)興起之初，Transomic便迅速跟進(jìn)，不僅獲得了相關(guān)技術(shù)的使用許可，更在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了深入的優(yōu)化與開發(fā)。他們推出的基因編輯試劑，融合了當(dāng)下最新的科研成果，使得科研人員能夠以更為便捷、高效的方式進(jìn)行基因敲除、敲入以及激活和干擾等操作。這種將前沿技術(shù)“落地"的能力，大大縮短了科研人員從構(gòu)思實(shí)驗(yàn)到實(shí)施操作的時(shí)間周期。

2. 豐富且全面的產(chǎn)品矩陣

Transomic的產(chǎn)品線涵蓋了基因編輯、基因沉默、基因過表達(dá)以及靶向富集等多個(gè)研究領(lǐng)域。無論是需要進(jìn)行單個(gè)基因的功能驗(yàn)證，還是開展全基因組水平的高通量篩選，Transomic都能提供相應(yīng)的解決方案。這種一站式的產(chǎn)品布局，能夠讓科研人員在同一技術(shù)體系下完成復(fù)雜的多步驟實(shí)驗(yàn)，有效保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的連貫性與可靠性。

3. 嚴(yán)苛的質(zhì)量控制體系

在生命科學(xué)研究中，試劑的穩(wěn)定性和重復(fù)性是最為關(guān)鍵的指標(biāo)。Transomic對(duì)其售出的每一款產(chǎn)品都有著嚴(yán)格的質(zhì)量把控標(biāo)準(zhǔn)。從最初的設(shè)計(jì)合成，到中期的形式驗(yàn)證，再到最終的產(chǎn)品分裝與質(zhì)檢，每一個(gè)環(huán)節(jié)都設(shè)有明確的質(zhì)控節(jié)點(diǎn)。例如，在其cDNA克隆產(chǎn)品的生產(chǎn)中，所有克隆在出庫(kù)前都會(huì)經(jīng)過完整測(cè)序驗(yàn)證，以確保序列的完整性和插入方向的準(zhǔn)確性。這種對(duì)細(xì)節(jié)的苛求，降低了因試劑質(zhì)量問題導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)失敗風(fēng)險(xiǎn)。

4. 靈活定制與技術(shù)支持

面對(duì)科研課題的多樣化需求，標(biāo)準(zhǔn)化的產(chǎn)品有時(shí)難以覆蓋。Transomic擁有一支由經(jīng)驗(yàn)豐富的分子生物學(xué)家和基因工程師組成的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)。他們不僅能夠?yàn)榭蛻籼峁┰敱M的產(chǎn)品使用指導(dǎo)，還能根據(jù)客戶的具體實(shí)驗(yàn)需求，提供從載體構(gòu)建、文庫(kù)設(shè)計(jì)到基因編輯細(xì)胞系定制的個(gè)性化服務(wù)方案。這種深度介入實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的技術(shù)支持，往往能幫助客戶在遇到困難時(shí)迅速找到破局點(diǎn)。

5. 便捷的獲取渠道與本土化服務(wù)

借助像上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司這樣專業(yè)且高效的合作伙伴，Transomic的產(chǎn)品得以更順暢地進(jìn)入國(guó)內(nèi)科研市場(chǎng)。這種合作模式不僅保證了試劑在運(yùn)輸過程中的低溫鏈完整性，還解決了科研人員在采購(gòu)進(jìn)口試劑時(shí)常常遇到的貨期長(zhǎng)、溝通不暢等問題。上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司憑借其專業(yè)的物流與客服團(tuán)隊(duì)，為國(guó)內(nèi)用戶搭建了一座通往優(yōu)質(zhì)進(jìn)口試劑的堅(jiān)固橋梁。

?? 熱門產(chǎn)品深度解析

Transomic的產(chǎn)品組合猶如一個(gè)龐大的基因操作工具箱，其中幾款明星產(chǎn)品憑借其出色的性能和穩(wěn)定性，在科研圈內(nèi)積累了良好的口碑。以下我們將選取幾款具有代表性的熱門產(chǎn)品，從品名、特點(diǎn)、存儲(chǔ)條件、工作原理到使用方法進(jìn)行詳細(xì)的拆解說明。

產(chǎn)品一：transEDIT™ CRISPR-Cas9基因編輯試劑

•   品名：transEDIT™ CRISPR-Cas9 Reagents

•   產(chǎn)品特點(diǎn)：

    該系列產(chǎn)品的最大特點(diǎn)是提供了多樣化的載體選擇和優(yōu)化的gRNA設(shè)計(jì)。它包含了多種產(chǎn)品形式，如All-in-one系列（gRNA和Cas9設(shè)計(jì)在一個(gè)載體上）、雙載體系列（gRNA和Cas9分別在不同的載體上）以及Dual gRNA系列（兩個(gè)gRNA設(shè)計(jì)在一個(gè)載體上，配合Cas9載體使用）。此外，載體上還帶有多種熒光和抗性標(biāo)記，方便進(jìn)行后續(xù)的轉(zhuǎn)染篩選。對(duì)于需要進(jìn)行高通量研究的客戶，還提供了預(yù)制好的全基因組文庫(kù)產(chǎn)品。

•   存儲(chǔ)條件：

    該產(chǎn)品通常以質(zhì)粒DNA、慢病毒顆粒或甘油菌的形式提供。質(zhì)粒DNA形式建議在-20°C環(huán)境下保存，慢病毒顆粒和甘油菌形式則必須在-80°C超低溫冰箱中保存，以保持其感染活性和穩(wěn)定性。切忌反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致滴度下降或DNA降解。

•   工作原理：

    該產(chǎn)品基于細(xì)菌獲得性免疫機(jī)制改造而來。其核心組件包括一個(gè)人工設(shè)計(jì)的單向?qū)NA（gRNA）和Cas9核酸酶（或切口酶）。gRNA能夠特異性識(shí)別目標(biāo)DNA序列，并引導(dǎo)Cas9酶前往該位點(diǎn)。Cas9酶隨后在目標(biāo)位點(diǎn)切開DNA雙鏈，造成雙鏈斷裂（DSB）。在細(xì)胞自身修復(fù)這些斷裂時(shí)，會(huì)引入插入或缺失突變（Indels），從而導(dǎo)致目標(biāo)基因發(fā)生移碼突變，實(shí)現(xiàn)基因敲除。如果同時(shí)提供供體DNA模板，細(xì)胞則可通過同源定向修復(fù)（HDR）機(jī)制實(shí)現(xiàn)精確的基因突變或敲入。

•   使用方法：

    1. 載體轉(zhuǎn)染：根據(jù)細(xì)胞類型選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑，將構(gòu)建好的CRISPR-Cas9載體（單載體或雙載體共轉(zhuǎn)染）導(dǎo)入目標(biāo)細(xì)胞。

    2. 病毒包裝與感染：若使用慢病毒形式，需先包裝慢病毒，測(cè)定滴度后再感染目標(biāo)細(xì)胞，可提高感染效率并獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)株。

    3. 篩選與驗(yàn)證：利用載體上的抗性標(biāo)記（如嘌呤霉素）篩選出成功轉(zhuǎn)入載體的細(xì)胞。隨后，通過T7E1酶切實(shí)驗(yàn)或測(cè)序分析，驗(yàn)證目標(biāo)位點(diǎn)的切割效率和基因型。

產(chǎn)品二：PLATINUM選擇shRNA-mir基因沉默試劑

•   品名：PLATINUM Selection shRNA-mir Reagents

•   產(chǎn)品特點(diǎn)：

    傳統(tǒng)的shRNA在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞和原代細(xì)胞中效率較低，而該產(chǎn)品通過引入基于傳感器的shRNA-mir構(gòu)建體，巧妙地解決了這一難題。它能夠在原代細(xì)胞和非分裂細(xì)胞中高效實(shí)現(xiàn)RNA干擾（RNAi）。產(chǎn)品經(jīng)過特殊設(shè)計(jì)，保證了較高的敲減效率，并且提供了多種選擇標(biāo)記，方便在多克隆細(xì)胞群體中進(jìn)行穩(wěn)定的基因沉默。

•   存儲(chǔ)條件：

    同樣以質(zhì)?；蚵《拘问教峁?。質(zhì)粒置于-20°C保存，慢病毒置于-80°C保存。溶解后的試劑建議分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致活性降低。

•   工作原理：

    RNA干擾（RNAi）是一種保守的基因沉默機(jī)制。該試劑中的shRNA（短發(fā)夾RNA）進(jìn)入細(xì)胞后，會(huì)被Dicer酶加工成siRNA（小干擾RNA）。siRNA隨后并入RISC（RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體）中，引導(dǎo)該復(fù)合體識(shí)別并結(jié)合與其序列互補(bǔ)的靶mRNA。一旦結(jié)合，RISC中的Argonaute蛋白會(huì)切割mRNA，導(dǎo)致其降解，從而在轉(zhuǎn)錄后水平阻斷目標(biāo)基因的表達(dá)。該產(chǎn)品采用的shRNA-mir結(jié)構(gòu)更符合哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的microRNA加工通路，因此在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表現(xiàn)更佳。

•   使用方法：

    1. 載體遞送：通過電轉(zhuǎn)染或病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式將shRNA表達(dá)載體送入靶細(xì)胞。

    2. 藥物篩選：加入相應(yīng)抗生素（如嘌呤霉素）篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞池。

    3. 敲減效果檢測(cè)：在轉(zhuǎn)染后48-72小時(shí)，收取細(xì)胞提取總RNA或蛋白質(zhì)，通過定量PCR（qRT-PCR）或Western Blot檢測(cè)目標(biāo)基因mRNA和蛋白水平的下降情況，評(píng)估沉默效率。

產(chǎn)品三：MGC premier cDNA克隆與ORF克隆

•   品名：MGC premier cDNA Clones / Tagged ORF Clones

•   產(chǎn)品特點(diǎn)：

    這是一套為基因過表達(dá)研究量身定制的產(chǎn)品。它提供了涵蓋人類、小鼠、大鼠、牛、爪蟾和斑馬魚等多個(gè)物種的全長(zhǎng)cDNA克隆。所有克隆均保證全長(zhǎng)序列完整，并且經(jīng)過了測(cè)序驗(yàn)證。對(duì)于需要進(jìn)行蛋白互作或定位研究的用戶，還提供了帶有Myc和FLAG等標(biāo)簽的ORF克隆，標(biāo)簽可以選擇性地融合在蛋白質(zhì)的N端或C端。

•   存儲(chǔ)條件：

    產(chǎn)品以帶有目的基因載體的大腸桿菌甘油菌形式提供，需在-80°C冷凍保存。劃板活化后的平板可在4°C短期保存（1-2周），但需密封防止干燥。

•   工作原理：

    cDNA（互補(bǔ)DNA）是通過逆轉(zhuǎn)錄mRNA得到的DNA序列，代表了基因的編碼區(qū)（ORF）。將這些 cDNA 片段克隆到帶有強(qiáng)啟動(dòng)子（如CMV啟動(dòng)子）的表達(dá)載體中，當(dāng)載體被導(dǎo)入真核細(xì)胞后，細(xì)胞自身的轉(zhuǎn)錄翻譯 machinery 會(huì)識(shí)別啟動(dòng)子并大量轉(zhuǎn)錄出mRNA，進(jìn)而翻譯成蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因在細(xì)胞內(nèi)的過量表達(dá)。標(biāo)簽蛋白（如FLAG, Myc）與目標(biāo)蛋白融合表達(dá)后，可以利用標(biāo)簽抗體的高親和力，方便地通過免疫沉淀（IP）或免疫熒光（IF）等技術(shù)研究目標(biāo)蛋白的相互作用網(wǎng)絡(luò)和亞細(xì)胞定位。

•   使用方法：

    1. 質(zhì)粒提取：挑取單克隆菌落培養(yǎng)，使用質(zhì)粒提取試劑盒制備高純度內(nèi)毒素游離的質(zhì)粒DNA。

2. 酶切與測(cè)序驗(yàn)證：使用特異性限制性內(nèi)切酶切下插入片段進(jìn)行大小驗(yàn)證，或送測(cè)序確認(rèn)序列無誤。

    3. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染與表達(dá)檢測(cè)：將驗(yàn)證正確的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至目標(biāo)細(xì)胞（如HEK293T），在轉(zhuǎn)染后24-48小時(shí)，通過Western Blot或熒光顯微鏡觀察目標(biāo)蛋白的表達(dá)情況和細(xì)胞定位。

產(chǎn)品四：TargetRich® NGS靶向富集產(chǎn)品

•   品名：TargetRich® NGS Target Enrichment Kit

•   產(chǎn)品特點(diǎn)：

    這是一款專為二代測(cè)序（NGS）前靶向捕獲富集而生的產(chǎn)品。它采用了創(chuàng)新的巢式補(bǔ)丁PCR（Nested Patch PCR）技術(shù)，擺脫了傳統(tǒng)雜交捕獲的繁瑣與高昂成本。其最大亮點(diǎn)在于真正的單管操作，整個(gè)富集流程僅需兩步PCR反應(yīng)和兩步純化步驟，人工操作時(shí)間僅需約1.25小時(shí)。它對(duì)低起始量的DNA樣本（如FFPE樣本）表現(xiàn)出高的兼容性，并能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)區(qū)域的高效、均勻覆蓋。

•   存儲(chǔ)條件：

    試劑盒中的酶混合物和引物混合物應(yīng)保存在-20°C。反應(yīng)緩沖液等組分可在4°C短期保存，長(zhǎng)期保存需置于-20°C。每次使用后應(yīng)立即放回冰箱，避免反復(fù)凍融以保持酶活性。

•   工作原理：

    該產(chǎn)品的工作原理基于高度多重化的巢式PCR。第一輪PCR使用外側(cè)引物，對(duì)含有靶向區(qū)域的基因組DNA進(jìn)行初步擴(kuò)增，大幅增加目標(biāo)序列的濃度。隨后，通過磁珠純化去除多余引物和dNTP。第二輪PCR則使用內(nèi)側(cè)引物（巢式引物），在已富集的目標(biāo)區(qū)域內(nèi)部進(jìn)行再次擴(kuò)增，并同時(shí)引入測(cè)序所需的接頭（Adapter）和樣本標(biāo)簽（Barcode）。這種兩步走的策略極大地提高了擴(kuò)增的特異性和文庫(kù)的質(zhì)量。

•   使用方法：

    1. 第一輪PCR富集：將提取的基因組DNA（10-250ng）與外側(cè)引物混合物、PCR預(yù)混液和酶混合后，放入PCR儀中進(jìn)行第一輪擴(kuò)增。

    2. 純化：使用提供的磁珠對(duì)第一輪PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化，去除小分子量的引物和引物二聚體。

    3. 第二輪PCR擴(kuò)增：將純化后的產(chǎn)物與內(nèi)側(cè)引物混合物、含有接頭的PCR預(yù)混液混合，進(jìn)行第二輪擴(kuò)增，引入測(cè)序接頭和Index。

    4. 二次純化與質(zhì)控：再次使用磁珠純化產(chǎn)物，使用Qubit和Agilent Bioanalyzer等儀器對(duì)最終文庫(kù)進(jìn)行濃度和片段大小檢測(cè)，隨后即可上機(jī)測(cè)序。

??? 直擊實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)：Transomic產(chǎn)品如何解決科研中的實(shí)際難題

在日常的科研工作中，研究人員往往會(huì)遇到各種各樣的實(shí)驗(yàn)瓶頸，這些瓶頸不僅消耗寶貴的時(shí)間和經(jīng)費(fèi)，更可能磨滅科研的熱情。Transomic的產(chǎn)品線正是針對(duì)這些常見的實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)而設(shè)計(jì)，提供了切實(shí)有效的解決方案。

痛點(diǎn)一：原代細(xì)胞及難轉(zhuǎn)染細(xì)胞中基因敲減效率低下

許多重要的生物學(xué)過程需要在原代細(xì)胞或非分裂細(xì)胞（如神經(jīng)元、巨噬細(xì)胞）中進(jìn)行研究，但傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染方法在這些細(xì)胞中效率極低，甚至?xí)?duì)細(xì)胞造成嚴(yán)重的毒性損傷。

解決方案：Transomic的PLATINUM選擇shRNA-mir試劑通過改變RNAi的加工路徑，使其依賴于細(xì)胞內(nèi)源的microRNA機(jī)制。這使得即使在較難轉(zhuǎn)染的原代細(xì)胞中，也能實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定的基因沉默。此外，結(jié)合慢病毒遞送系統(tǒng)，可以進(jìn)一步突破細(xì)胞類型的限制，實(shí)現(xiàn)幾乎所有細(xì)胞類型的基因操作。

痛點(diǎn)二：CRISPR-Cas9基因編輯脫靶效應(yīng)嚴(yán)重，背景噪音高

雖然CRISPR技術(shù)游戲，但其脫靶效應(yīng)一直是困擾科研人員的難題。非特異性的切割會(huì)導(dǎo)致基因組其他位點(diǎn)的突變，從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

解決方案：Transomic的transEDIT™ CRISPR-Cas9試劑采用了優(yōu)化設(shè)計(jì)的Croatan結(jié)構(gòu)gRNA。這種特殊的結(jié)構(gòu)能夠顯著提高gRNA的特異性，降低脫靶率。同時(shí)，其提供的雙載體系統(tǒng)和Cas9(D10A)切口酶選項(xiàng)，可以通過配對(duì)切割的方式進(jìn)一步確保編輯的精確度，讓基因敲除結(jié)果更加純凈、可靠。

痛點(diǎn)三：高通量測(cè)序前靶向富集步驟繁瑣、成本高昂且對(duì)低質(zhì)量樣本無效

在進(jìn)行癌癥基因 panel 測(cè)序或外顯子組測(cè)序時(shí)，傳統(tǒng)的雜交捕獲方法不僅需要耗費(fèi)大量的起始DNA，而且操作步驟極其繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)久。對(duì)于臨床常見的FFPE（福爾馬林固定石蠟包埋）樣本，由于DNA高度片段化，雜交捕獲的效率極低。

解決方案：TargetRich® NGS靶向富集產(chǎn)品應(yīng)對(duì)了這一挑戰(zhàn)。其基于巢式PCR的原理，僅需極少量的起始DNA（可底至10ng），且對(duì)嚴(yán)重降解的FFPE樣本具有強(qiáng)的耐受性。單管操作的簡(jiǎn)化流程不僅將手工時(shí)間縮短至1小時(shí)左右，還減少了樣本在多次轉(zhuǎn)移過程中的損失和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)，大大提升了實(shí)驗(yàn)的成功率和數(shù)據(jù)的均一性。

痛點(diǎn)四：過表達(dá)克隆測(cè)序錯(cuò)誤頻發(fā)，導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)全盤皆輸

在購(gòu)買商業(yè)化基因克隆時(shí)，序列的準(zhǔn)確性是基本底線。然而，市場(chǎng)上部分產(chǎn)品缺乏嚴(yán)格的質(zhì)檢，導(dǎo)致用戶拿到手的克隆存在點(diǎn)突變或移碼，直接影響了后續(xù)蛋白表達(dá)和功能驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

解決方案：Transomic對(duì)其所有的MGC premier cDNA克隆和ORF克隆實(shí)施了雙向測(cè)序驗(yàn)證。每一批次的產(chǎn)品在出廠前都經(jīng)過了嚴(yán)密的質(zhì)控檢查，確保插入片段的序列與參考序列一致，且閱讀框正確。這種對(duì)質(zhì)量的絕對(duì)把控，為科研人員省去了大量自行測(cè)序驗(yàn)證的麻煩，保障了下游實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。

?? 選購(gòu)與使用指南：關(guān)于Transomic產(chǎn)品的常見疑問解答

為了幫助大家更好地選擇和使用Transomic的產(chǎn)品，我們整理了在實(shí)際操作中最常遇到的一些疑問，并由上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)提供專業(yè)的解答。

疑問一：我在設(shè)計(jì)CRISPR敲除實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)該選擇單載體（All-in-one）還是雙載體系統(tǒng)？

解答： 這兩種系統(tǒng)各有優(yōu)勢(shì)，主要取決于您的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞類型。如果您使用的是易于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系（如HEK293T、HeLa），且希望操作簡(jiǎn)便，單載體（All-in-one）是很好的選擇，因?yàn)樗恍柽M(jìn)行一次轉(zhuǎn)染操作，載體上同時(shí)表達(dá)了gRNA和Cas9。但如果您需要高的敲除效率，或者使用的是難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，我們建議您選擇雙載體系列。雙載體系統(tǒng)允許您使用兩個(gè)強(qiáng)啟動(dòng)子分別驅(qū)動(dòng)gRNA和Cas9的表達(dá)，通常能產(chǎn)生更多的Cas9蛋白和gRNA，從而顯著提高編輯效率，尤其適合配合電轉(zhuǎn)或病毒感染使用。

疑問二：收到Transomic的甘油菌（如cDNA克?。┖?，可以直接用來提質(zhì)粒做轉(zhuǎn)染嗎？

解答： 不建議直接提取。甘油菌的主要作用是保證細(xì)菌的存活和質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。直接從中提取的質(zhì)粒產(chǎn)量低且可能含有雜質(zhì)。正確的做法是從甘油菌中劃線或直接挑取單克隆，接種到含有相應(yīng)抗生素的液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)12-16小時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增。然后再使用高質(zhì)量的質(zhì)粒提取試劑盒（如內(nèi)毒素去除型）進(jìn)行質(zhì)粒提取，這樣能獲得高濃度、高純度的質(zhì)粒用于后續(xù)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染或病毒包裝。

疑問三：進(jìn)行shRNA介導(dǎo)的基因敲減時(shí)，如何確定最佳的篩選抗生素濃度？

解答： 這是一個(gè)非常好的問題。不同細(xì)胞系對(duì)抗生素（如嘌呤霉素、殺稻瘟菌素等）的敏感性差異很大。在進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選前，必須先做一次殺傷曲線（Kill Curve）測(cè)定。具體方法是：將細(xì)胞鋪板，次日加入濃度梯度遞增的抗生素（例如0, 0.5, 1, 2, 4, 8 μg/mL的嘌呤霉素）。培養(yǎng)2-3天后，觀察細(xì)胞存活情況。選擇能夠在2-3天內(nèi)殺死所有細(xì)胞的低抗生素濃度作為后續(xù)穩(wěn)轉(zhuǎn)篩選的工作濃度。

疑問四：使用TargetRich®進(jìn)行靶向富集時(shí)，如果我的樣本是高度降解的FFPE切片，該如何處理以提高成功率？

解答： 針對(duì)FFPE樣本，首先要確保提取的DNA有一定的濃度和純度，盡量避免RNA和有機(jī)溶劑的污染。在TargetRich®流程中，由于是基于PCR的富集，對(duì)片段大小有一定的寬容度。但為了回收率，建議在第一輪PCR時(shí)適當(dāng)增加循環(huán)數(shù)（例如從推薦的25個(gè)循環(huán)增加到28-30個(gè)循環(huán)），同時(shí)在第二輪PCR時(shí)保持循環(huán)數(shù)不變或微調(diào)。此外，使用高質(zhì)量的磁珠進(jìn)行純化，確保去除引物二聚體，是提高最終文庫(kù)質(zhì)量的關(guān)鍵。

疑問五：通過上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司訂購(gòu)這些進(jìn)口產(chǎn)品，貨期和售后如何保障？

解答： 上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司擁有成熟的進(jìn)口物流體系和專業(yè)的倉(cāng)儲(chǔ)條件。對(duì)于Transomic的常規(guī)現(xiàn)貨產(chǎn)品，通常能在較短的時(shí)間內(nèi)完成清關(guān)并送達(dá)客戶手中。對(duì)于非常規(guī)產(chǎn)品或定制化需求，客服團(tuán)隊(duì)會(huì)提供精準(zhǔn)的貨期預(yù)估。在售后方面，上海起發(fā)配備了專業(yè)的技術(shù)支持人員，能夠協(xié)助解決產(chǎn)品在運(yùn)輸、存儲(chǔ)及實(shí)驗(yàn)操作過程中遇到的各種技術(shù)難題，確保每一位客戶都能順利推進(jìn)實(shí)驗(yàn)。

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